暗視野顯微鏡檢查法

　　暗視野顯微鏡又叫暗場(chǎng)顯微鏡，是一種通過(guò)觀(guān)察樣品受側向光照射時(shí)所產(chǎn)生的散射光來(lái)分辨樣品細節的特殊顯微鏡。

　　1、暗視野顯微鏡的原理和結構特點(diǎn)

　　暗視野顯微鏡和一般的明視野顯微鏡區別在于二者的聚光器不同，暗視野顯微鏡裝有一個(gè)中央遮暗的聚光器，使光線(xiàn)不能通過(guò)聚光器，而只能從聚光器四周邊及未遮暗的部位斜射到載玻片的標本上。因光線(xiàn)是斜射的，不能進(jìn)入物鏡，故觀(guān)察的視野是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線(xiàn)，因光散射作用而使菌體發(fā)出亮光，反射到物鏡內，這樣在顯微鏡中可見(jiàn)到暗視野中明亮的物像。

　　暗視野顯微鏡主要用于檢查未染色標本的形態(tài)和運動(dòng)能力。

　　2、操作方法

　�、偈褂醚芯坑冒狄曇帮@微鏡，或將普通光學(xué)顯微鏡上的聚光器取下，換上暗場(chǎng)聚光器。

　�、诓徽撌鞘褂酶稍镂镧R還是油浸物鏡，鏡檢時(shí)都應在聚光器的上透鏡上加一大滴香柏油。

　�、蹖⒅谱骱玫募毦鷳业螛吮酒�置于載物臺上，上升聚光器至頂部使油與載玻片接觸。

　�、芊糯蠊庠� 。

　�、葸M(jìn)行聚光器光軸調節及調焦。用10*物鏡找到被檢物像，關(guān)小聚光器虹彩光圈至可在視野中看到視場(chǎng)光闌的輪廓，再上下緩慢調整聚光器，這樣會(huì )使視場(chǎng)光闌的像變得清晰，如視場(chǎng)光闌不在場(chǎng)中央，利用聚光器外側 的兩個(gè)調節鈕進(jìn)行調整，當亮光點(diǎn)調到場(chǎng)中央后，再將其開(kāi)大，即可進(jìn)行觀(guān)察。

　　3、注意事項

　�、侔狄曇坝^(guān)察所用物鏡的數值孔徑宜在1.00—1.25左右，太高反而效果不佳，最好是使用帶視場(chǎng)光闌的物鏡，轉動(dòng)物鏡中部的調節環(huán)，可隨意改變數值孔徑的大小。

　�、谝�求使用的載玻片和蓋玻片必須無(wú)劃痕且無(wú)灰塵，物鏡前透鏡也必須清潔無(wú)塵。載玻片與蓋玻片的厚度應符合標準。載玻片太厚，聚光器的焦點(diǎn)將落在載玻片內，達不到被檢物體的平面上;使用油鏡頭時(shí)，由于物鏡的工作距離很短，甚至無(wú)法調焦，從而看不到或看不清被檢物體。

　�、坨R檢時(shí)室內要暗，如果沒(méi)有這樣的條件，應盡可能使用遮光裝置，以阻止目鏡周?chē)�的光線(xiàn)射入。

　�、茉谶M(jìn)行油鏡鏡檢時(shí)，由于油內的雜質(zhì)和氣泡的漫反射，會(huì )妨礙視場(chǎng)的鏡檢效果，所以要求盡可能地除掉油內的雜質(zhì)和氣泡。