分光光度計測量誤差來(lái)源淺析

　　1儀器本身性能帶來(lái)的誤差

　　1.1復色光對比耳定律的偏離

　　比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光，但是精度再高的儀器，即使是雙單色器的分光光度計，也只能獲得近乎單色的光，無(wú)法獲得純單色光，它仍然含有狹窄光通帶，具有復色光的性質(zhì)。而復色光會(huì )導致比耳定律的正或負偏離。固定狹縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm，可調狹縫的可以做到0.Inm;可見(jiàn)分光光度計帶寬6nm、snm，甚至十幾納米。光譜帶寬應該是越小越好，但是隨著(zhù)光譜分辨率的提高，儀器的靈敏度降低，所以選擇儀器時(shí)要綜合考慮各種條件的影響。當溶液濃度較小且單色光較純時(shí)，可近似認為符合比耳定律。

　　1.2雜散光的影響

　　雜散光是指進(jìn)人檢測器的處于待測波長(cháng)光譜帶寬范圍外的其他波長(cháng)組分，它是光譜測量中誤差的主要來(lái)源。產(chǎn)生原因有:分光光度計的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內壁灰塵等。在分光光度計工作波段邊緣波長(cháng)處，由于單色器透光率、光源輻射強度、檢測器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著(zhù)。雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴重的測量誤差，實(shí)際工作中，在定量分析時(shí)，一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度，如果在分析波長(cháng)處含有雜散光，這時(shí)樣品的透光率較小，而雜散光大部分透過(guò)，使測量吸光度低于真實(shí)吸光度。

　　1.3儀器噪聲對測t的影響

　　儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號，掃描100%T和0%T線(xiàn)，可觀(guān)察到分光光度計的絕對噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會(huì )掩蓋較小的測量信號，一般用噪音的二倍來(lái)表示儀器的靈敏度。

　　1.4波長(cháng)和吸光度準確度

　　樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長(cháng)下測得的，如果波長(cháng)誤差很大，測出的值肯定不準。吸光度準確度也是用戶(hù)對儀器的直接要求，更應引起足夠的重視。國家計量檢定規程規定雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計透射比準確度為A級士0.6%， B級土1.0%。

　　2測量條件的選擇

　　2.1參比溶液和溶荊的選擇

　　分光光度計的測量實(shí)際上是以通過(guò)參比池的光強度作為人射光強度來(lái)測定試樣的吸光度，先調節儀器使透過(guò)參比池溶液的吸光度為零，然后讓同一束光通過(guò)樣品，使得吸光度比較真實(shí)地反映待測物質(zhì)的濃度，所以參比溶液的選擇非常重要。如果僅有待測物質(zhì)與顯色劑的反應產(chǎn)物有吸收，可用純溶劑或蒸餾水作參比溶液。如果顯色劑有顏色，并在測定波長(cháng)下有吸收，則用顯色劑溶液作參比溶液，所加人顯色劑及其它試劑的量，與試樣中的加入量應一致。如果樣品中其它組分本身的顏色對測定有干擾，而所用顯色劑沒(méi)顏色，則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。

　　正確選擇合適的溶劑，對提高分析的準確度起重要作用。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響，應選擇高純度的溶劑;溶劑應不與待測物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應;待測物在溶劑中要有一定的溶解度;在測定的波長(cháng)范圍內，溶劑本身沒(méi)有吸收，注意常用溶劑的最短可用波長(cháng);當用揮發(fā)性大的溶劑時(shí)，測量過(guò)程中吸收池應加蓋。

　　2.2測試波長(cháng)的選擇

　　當用分光光度計對溶液進(jìn)行測定時(shí)，首先需要選擇合適的測量波長(cháng)。選擇的依據是該被測溶液的吸收曲線(xiàn)。在一般情況下，我們總是選擇最大吸收波長(cháng)作為測量波長(cháng)，這樣可以提高靈敏度。而在有些情況下最大吸收峰很尖銳、吸收過(guò)大或附近有干擾存在，就不能選最大吸收波長(cháng)，而必須在保證有一定靈敏度的情況下，選擇吸收曲線(xiàn)中的其它波長(cháng)進(jìn)行測定(曲線(xiàn)較平坦處對應的波長(cháng))，以消除干擾。繪制吸收曲線(xiàn)是正確選擇波長(cháng)的有效手段和方法。