如何定量檢測cAMP和cGMP

　　1958年Sutherland發(fā)現了cAMP(環(huán)磷酸腺苷)，并因此獲得了1971年諾貝爾生理與醫學(xué)獎[1]. 1963年Ashman發(fā)現了cGMP(環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷)[2]。50年過(guò)去了，人們已明白cAMP、cGMP是在很多生理過(guò)程中發(fā)揮重要調節作用的第二信使分子。鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶可將GTP催化生成cGMP，cGMP可以被磷酸二酯酶水解成GDP。激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加細胞內cGMP的含量。cGMP特異性磷酸二酯酶的抑制劑被用來(lái)治療人類(lèi)的某些疾病，比如cGMP特異性磷酸二酯酶類(lèi)型5的抑制劑(偉哥和西力士)被用來(lái)治療ED(勃起功能障礙);腺苷酸環(huán)化酶將ATP催化生成cAMP，cAMP可以被磷酸二酯酶水解成ADP。激活腺苷酸環(huán)化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加細胞內cAMP的含量。腺苷酸環(huán)化酶激活受體的阻斷劑和cAMP特異性磷酸二酯酶的抑制劑被用來(lái)治療人類(lèi)的某些疾病，比如針對升高cAMP水平的b-腎上腺素受體的阻斷劑被用于治療心律失常、高血壓、心肌梗塞和心力衰竭等疾病。

　　在五十年的研究歷程中，從開(kāi)始研究cAMP，cGMP在各種生理過(guò)程中的調節作用，到近幾年與之相關(guān)的藥物研發(fā)，藥物篩選領(lǐng)域，人們一直在努力尋找一種快速、靈敏、特異性和可重復地定量檢測cAMP和cGMP含量的方法。

　　檢測方法演變

　　cAMP，cGMP分子量分別只有329.21和345.21，在機體內的含量極低，為p mol/L級別，用一般的分析方法無(wú)法測定。70年代一系列測定cAMP和cGMP的方法被發(fā)明出來(lái)，最基本的原理有三種：分別是競爭性蛋白質(zhì)結合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄層色譜法[5]。在80年代，放射性免疫分析法得到了廣泛的應用和改進(jìn)，由于這種方法采用放射性核素標記，應用范圍受到一定限制，為了進(jìn)一步提高檢測的靈敏度和操作的安全性，進(jìn)入90年代又陸續發(fā)明了各種酶標記法和化學(xué)發(fā)光法的競爭性ELISA檢測試劑盒，這一類(lèi)檢測方法的根本原理都是基于抗體抗原的免疫反應，所有這些試劑盒中采用的抗體全部是兔抗血清或者是經(jīng)過(guò)特異親和提純之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫無(wú)疑問(wèn)，兔多抗在約四十年的cAMP，cGMP定量檢測中做出了巨大貢獻，但同時(shí)它也有著(zhù)明顯的缺陷：

　　1，兔多抗對cAMP，cGMP的特異性不高，會(huì )與其他核苷類(lèi)似分子發(fā)生交叉反應，盡管可以通過(guò)特異親和提純降低交叉，但仍然無(wú)法消除交叉;

　　2，兔多抗對cAMP和cGMP的親和力受高濃度的二價(jià)陽(yáng)離子(比如Mg2+和Ca2+)的影響;

　　3，兔多抗在制備的過(guò)程中存在個(gè)體差異和批間差異，難以保證檢測數據的重復性;

　　4，兔多抗試劑盒在cAMP，cGMP樣品的處理上也需要進(jìn)行乙�；�處理，這與兔多克隆抗體制備方法有必然關(guān)系，如果不乙�；瘜�無(wú)法達到檢測所需的靈敏度。

　　所以無(wú)論標記方法如何革新，不改進(jìn)抗體，仍然不能從根本上迎來(lái)cAMP，cGMP定量檢測的變革。