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    簡(jiǎn)析微分干涉差顯微鏡結構組成

    [2013/3/13]

      DIC顯微鏡又稱(chēng)Nomarski相差顯微鏡,其優(yōu)點(diǎn)是能顯示結構的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比,其標本可略厚一點(diǎn),折射率差別更大,故影像的立體感更強。

      DIC顯微鏡的物理原理完全不同于相差顯微鏡,技術(shù)設計要復雜得多。DIC利用的是偏振光,有四個(gè)特殊的光學(xué)組件:偏振器(polarizer)、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器(analyzer)。偏振器直接裝在聚光系統的前面,使光線(xiàn)發(fā)生線(xiàn)性偏振。在聚光器中則安裝了石英Wollaston棱鏡,即DIC棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光(x和y),二者成一小夾角。

      聚光器將兩束光調整成與顯微鏡光軸平行的方向。最初兩束光相位一致,在穿過(guò)標本相鄰的區域后,由于標本的厚度和折射率不同,引起了兩束光發(fā)生了光程差。在物鏡的后焦面處安裝了第二個(gè)Wollaston棱鏡,即DIC滑行器,它把兩束光波合并成一束。這時(shí)兩束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿過(guò)第二個(gè)偏振裝置,即檢偏器。

      在光束形成目鏡DIC影像之前,檢偏器與偏光器的方向成直角。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光,從而使二者發(fā)生干涉。x和y波的光程差決定著(zhù)透光的多少。光程差值為0時(shí),沒(méi)有光穿過(guò)檢偏器;光程差值等于波長(cháng)一半時(shí),穿過(guò)的光達到最大值。于是在灰色的背景上,標本結構呈現出亮暗差。

      為了使影像的反差達到最佳狀態(tài),可通過(guò)調節DIC滑行器的縱行微調來(lái)改變光程差,光程差可改變影像的亮度。調節DIC滑行器可使標本的細微結構呈現出正或負的投影形象,通常是一側亮,而另一側暗,這便造成了標本的人為三維立體感,類(lèi)似大理石上的浮雕。

      DIC顯微鏡使細胞的結構,特別是一些較大的細胞器,如核、線(xiàn)粒體等,立體感特別強,適合于顯微操作。目前像基因注入、核移植、轉基因等的顯微操作常在這種顯微鏡下進(jìn)行。

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