多糖類(lèi)物質(zhì)的離子色譜檢測技術(shù)研究

　　離子色譜法自1975年問(wèn)世以來(lái)發(fā)展迅速，已經(jīng)在環(huán)境監測、電力、半導體工業(yè)、食品、石油化工、醫療衛生和生化等領(lǐng)域得到廣泛應用，已有數十項成為有關(guān)權威機構的標準方法。鑒于糖類(lèi)化合物分子具有電化學(xué)活性及在強堿溶液中呈離子化狀態(tài)，roxklin等于1983年首先報道了用陰離子交換色譜柱分離，脈沖安培檢測器測定糖的新方法(簡(jiǎn)稱(chēng)hpaec)。

　　用離子色譜法檢測糖類(lèi)，尋求操作簡(jiǎn)單，結果準確的檢測體系，值得每一位分析化學(xué)學(xué)者進(jìn)行深入研究。

　　本文包括兩個(gè)部分。

　　第一部分是文獻綜述，這部分結合多糖的利用價(jià)值及提取方法，評述了近十年離子色譜檢測技術(shù)的發(fā)展以及其它相關(guān)領(lǐng)域在多糖類(lèi)物質(zhì)檢測中的研究和應用。

　　第二部分是研究報告。首先研究了綠茶中茶葉多糖的最佳提取方法和離子色譜檢測茶葉多糖中的2種單糖的技術(shù)，在建立了高效，便捷的分析方法的同時(shí)選擇了最佳的提取條件。利用溫水浸提綠茶茶葉，超聲輔助乙酸水解綠茶粗多糖，以metrosepcarb1(150×4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，以6.0mmol/lnaoh溶液為洗脫液，在32℃的條件下對綠茶粗多糖水解液進(jìn)行檢測，實(shí)現了對綠茶粗多糖中的葡萄糖和甘露糖兩種單糖的完全分離和定量檢測。

　　在此研究基礎上，對其他不同種類(lèi)茶葉多糖進(jìn)行了分析研究，進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗條件，由對單純兩種單糖的分析拓展到同時(shí)分析檢測四種單糖，取得了良好的試驗效果，并且打破了多種單糖需要進(jìn)行梯度淋洗才可實(shí)現分離的復雜方法，實(shí)現了固定濃度淋洗液直接分離多種單糖的高效方法。

　　基于此，將該法的應用延伸到真菌類(lèi)和中藥領(lǐng)域，分別檢測了香菇多糖和山藥多糖，取得了良好的實(shí)驗效果;從而進(jìn)一步驗證了該方法的應用價(jià)值。但在以上研究過(guò)程中，存在著(zhù)對多糖水解液果糖檢測方面的不足，突出表現為靈敏度低、分析時(shí)間過(guò)長(cháng)等缺點(diǎn)。為了完善檢測方法，繼續優(yōu)化實(shí)驗條件，對果糖的檢測方法進(jìn)行改進(jìn)，建立快速、高效檢測多糖中的果糖的離子色譜檢測方法，實(shí)驗取得了很好的效果，得到了高的靈敏度和準確度，以及低的檢測限。

　　一.綠茶中茶多糖的提取與離子色譜檢測方法研究本文在不同浸提條件下提取綠茶粗多糖的基礎上，建立了用高效陰離子交換分離一脈沖安培檢測(hpae—pad)，在32℃的條件下分離測定綠茶茶葉多糖中的葡萄糖和甘露糖2種單糖的分析方法。以metrosepcarb1(150×4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，6.0mmol/lnaoh溶液為淋洗液，淋洗液流速為1.0ml/min，總分析時(shí)間為35min。在優(yōu)化的分離條件下，葡萄糖和甘露糖的檢出限分別為0.125mg/l和2.0mg/l(進(jìn)樣體積20μl，峰高定量)。用20mg/l葡萄糖和甘露糖的混標溶液連續7次進(jìn)樣，兩種單糖峰高的相對標準偏差分別為5.79%和14.15%，保留時(shí)間的相對標準偏差分別為2.08%和2.19%。樣品測定的回收率為94.9%-97.5%。用所建立的方法快速、有效分離了綠茶茶葉多糖中的葡萄糖和甘露糖，同時(shí)確定了茶葉多糖的最佳提取條件。

　　二.離子色譜法測定各種茶葉中的茶多糖研究建立了用高效陰離子交換分離—脈沖安培檢測分離測定不同種茶葉多糖中的半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖的分析方法。以metrosepcarb1(150x4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，以6.0mmol/l—naoh溶液為淋洗液在32℃的條件下將4種單糖從分離柱上洗脫，淋洗液流速為1.0ml/min，總分析時(shí)間為45min。在優(yōu)化的分離條件下4種單糖的檢出限為0.125mg/l～2.0mg/l(進(jìn)樣體積20μl，峰高定量)。用20mg/l的半乳糖、葡萄糖、甘露糖和30mg/l的果糖混標溶液連續7次進(jìn)樣，峰高的相對標準偏差為5.82%～14.19%，保留時(shí)間的相對標準偏差為2.03%～2.26%。樣品測定的回收率為91.8%～99.3%。用所建立的方法快速、有效分析了4種常見(jiàn)茶葉多糖，得到了滿(mǎn)意的檢測結果。

　　三.香菇多糖和山藥多糖的離子色譜檢測方法研究建立了離子色譜法分離測定香菇多糖和山藥多糖的分析方法。以metrosepcarb1(150×4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，脈沖安培檢測，以7.0mmol/lnaoh溶液為淋洗液，淋洗液流速1.0ml/min，總分析時(shí)間為35min。在優(yōu)化的分析條件下，3種單糖的檢測限分別為半乳糖0.125mg/l，葡萄糖0.5mg/l，甘露糖1.0mg/l(進(jìn)樣體積20μl，峰高定量)，用30mg/l的標準樣品混合溶液連續進(jìn)樣6次，峰高的相對標準偏差為1.79%～3.52%，保留時(shí)間的rsd為3.07%～3.29%，樣品測定的回收率為96.3%～99.5%。

　　運用上述方法分離檢測香菇多糖和山藥多糖，得到了良好的分離效果和較高的檢測靈敏度，分析結果令人滿(mǎn)意。四.離子色譜法檢測多糖水解液中果糖的研究建立了陰離子交換分離—脈沖安培檢測分析檢測多糖水解液中的果糖的離子色譜方法，并且分別討論了峰高和峰面積兩種不同分析定量方法的準確度。用metrosepcarb1(150×4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，以100mmol/lnaoh溶液為淋洗液，流速為1.0ml/min，總分析時(shí)間為13min。在優(yōu)化的色譜條件下，果糖的最低檢出限為0.4mg/l(進(jìn)樣體積20μl)。用10mg/l果糖標準溶液連續進(jìn)樣7次，峰高的相對標準偏差為1.64%。峰面積的rsd為3.43%，保留時(shí)間的rsd為0.36%。樣品的加標回收率為94.6%～96.1%(峰高定量)和93.2%～95.6(峰面積定量)。用所建立的方法快速、準確的分析了三種茶葉多糖水解液，分析結果令人滿(mǎn)意。