乳制品中抗生素殘留現狀及其檢測方法探究

　　摘要：綜述了乳制品中抗生素殘留現狀和危害，以及各種抗生素殘留的檢測方法，為加強我國乳制品中的抗生素監測，解決目前乳品工業(yè)發(fā)展中面臨的難題提供參考。

　　關(guān)鍵詞：乳制品;抗生素殘留;

　　檢測方法

　　乳及乳制品是老少皆宜的營(yíng)養品，在我國，乳制品及乳制品工業(yè)發(fā)展迅速，同時(shí)畜牧業(yè)也發(fā)展迅猛，β-內酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內酯類(lèi)等抗生素在乳畜飼養業(yè)中廣泛應用，造成乳及乳制品中抗生素殘留，給消費者健康帶來(lái)了潛在威脅，因而提高抗生素殘留的檢測技術(shù)顯得尤其重要，盡快開(kāi)發(fā)或引進(jìn)先進(jìn)的抗生素檢測技術(shù)以解決我國當前乳和乳制品行業(yè)面臨的難題已成為當務(wù)之急。

　　1抗生素殘留現狀

　　我國乳制品中抗生素的殘留現狀不容樂(lè )觀(guān)，2006年的一份對北京、天津、石家莊5個(gè)零售點(diǎn)的77個(gè)牛奶樣品進(jìn)行β-內酰胺酶的殘留檢測，63.6%的樣品檢測為陽(yáng)性。一項對我國幾個(gè)大城市如西寧、南寧、廣州、杭州、泉州、北京等城市乳制品質(zhì)量的檢測調查結果顯示，在近八百份乳品采樣中，抗生素殘留超標居不合格項目第一位。

　　2抗生素殘留的來(lái)源及其危害

　　乳和乳制品中抗生素殘留的來(lái)源要追尋到原料生產(chǎn)及其流通過(guò)程。首先，使用抗生素防治動(dòng)物疫病。對患病奶牛用藥不當及不遵守停藥期是造成牛奶中抗生素殘留的重要因素。其次，抗生素類(lèi)飼料添加劑的使用。第三，飼養戶(hù)和經(jīng)營(yíng)商為了保鮮，將抗生素人為添加到畜產(chǎn)品中，來(lái)抑制微生物的生長(cháng)、繁殖，防止牛奶酸敗變質(zhì)，也是造成抗生素殘留超標的重要因素。

　　從乳制品加工的角度來(lái)看，原料乳中抗生素殘留物嚴重干擾發(fā)酵乳制品的生產(chǎn)，抗生素殘留可嚴重影響干酪、黃油、發(fā)酵乳的起酵和后期風(fēng)味的形成。長(cháng)期服用含低劑量抗生素殘留的乳制品，日積月累會(huì )危害人體健康。主要危害表現在：其一，毒性作用，如長(cháng)期攝入氨基糖苷類(lèi)抗生素嚴重超標的乳產(chǎn)品可導致腎毒性和耳毒性。其二，過(guò)敏反應。其三，病原菌耐藥性增加。其四，破壞人體胃腸道微生物菌群的動(dòng)態(tài)平衡。其五，妨礙我國畜產(chǎn)品的國際貿易。

　　3抗生素殘留檢測方法的研究進(jìn)展

　　目前抗生素殘留檢測的方法很多，基本上可以分為四大類(lèi)型：一是經(jīng)典的微生物檢測方法;二是現代儀器分析方法;三是生化免疫分析法;四是專(zhuān)一試劑盒法。��

　　3.1經(jīng)典微生物檢測法

　　其測定原理基于抗生素對微生物的生理機能、代謝的抑制作檢測用，因而與臨床應用的要求一致，但其測定時(shí)間長(cháng)且結果誤差較大。如TTC法、戴爾沃檢測(DelvotestSP)法、BY法等。

　　3.1.1TTC法

　　TTC法是國際上較早通用的標準測定法，也是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗標準(GB4689.27-94)規定的檢測法。如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種(嗜熱鏈球菌)經(jīng)培育2.5-3h后，加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發(fā)生還原反應，所以樣品呈無(wú)色狀態(tài);如果牛奶中不含抗生素，則樣品呈紅色。TTC法檢測的各種抗生素靈敏度如下：青霉素為0.004單位、鏈霉素0.5單位、慶大霉素0.4單位、卡那霉素5單位。TTC法主要對于青霉素類(lèi)和氯霉素藥物敏感，但對鏈霉素不太敏感，對新霉素根本不敏感，并且消毒劑可干擾TTC試驗。TTC法檢測抗生素殘留雖然費用較低，但檢測方法消耗時(shí)間也相對較長(cháng)，因此應用受到一定限制。

　　3.1.2戴爾沃檢測(DelvotestSP)法

　　原理是利用微生物——嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養2.5～3h后會(huì )產(chǎn)酸，酸引起指示劑BCP(溴甲酚紫)變?yōu)辄S色;若牛奶樣品中不含抗生素，培養后樣品呈黃色，如樣品中含有抗生素,嗜熱芽胞菌生長(cháng)受到抑制而無(wú)法產(chǎn)酸，指示劑將不變色�？蓹z測到β-內酰胺類(lèi)抗生素在內的更多抗生素，如磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)等，其中對青霉素和磺胺類(lèi)抗生素特別靈敏。DelvotestSP法操作方便，嚴格實(shí)用，容易判斷，結果可靠，費用適中等優(yōu)點(diǎn);但也易出現假陽(yáng)性，此方法適用于農場(chǎng)、企業(yè)、實(shí)驗室及政府監測部門(mén)。

　　3.1.3BY法

　　BY法，也稱(chēng)藍黃檢測法，是一種廣譜的微生物抑制法，能在較短的時(shí)間里檢測到乳制品中抗生素的殘留，通過(guò)顏色的對比判斷陽(yáng)性、陰性和可疑樣品。B•Linage等通過(guò)這種方法對β-內酰胺類(lèi)、大環(huán)內酯類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)等25種抗生素進(jìn)行了檢測，其殘留的檢測限與歐盟規定的檢測限很接近。此方法耗時(shí)短，操從簡(jiǎn)單，檢測抗生素種類(lèi)較多，但誤差較大，容易誤檢。

　　3.2現代儀器分析方法

　　是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應或理化特性，借助現代儀器對抗生素殘留進(jìn)行精確分析的一種方法。如色譜法、熒光法、毛細管電泳、色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等。

　　色譜法有氣相色譜(GS)、高效液相色譜(HPLC)法、反相高效液相色譜法等。檢測的過(guò)程運用了色譜理論，通過(guò)高靈敏度的檢測器，分離速度快、效率高和操作自動(dòng)化。一般要經(jīng)過(guò)樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟，能檢測抗生素的具體含量。蔡穎用反相HPLC法測定乳制品中土霉素、四環(huán)素和金霉素殘留量。檢測限為：土霉素為15.0μg/kg、四環(huán)素為20.0μg/kg、金霉素為18.0μg/kg。JianWang等運用超高效液相色譜和飛行質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC/Q-TofMS)和LC/MS/MS測定牛奶中大環(huán)內酯類(lèi)抗生素的殘留量，其檢測限為：紅霉素40ug/kg，泰樂(lè )菌素50ug/kg，替米考星50ug/kg，能滿(mǎn)足各國對這六種β-內酰胺類(lèi)抗生素的最低檢出要求。

　　儀器分析方法分離速度快、效率高和自動(dòng)化程度高，能檢測抗生素的具體含量，敏感性較高，結果準確，但待檢樣品需經(jīng)一系列的預處理，繁瑣費時(shí)，還必須有相應的價(jià)格昂貴的儀器設備。一般在大型實(shí)驗室使用，適合于精確測定。

　　3.3生化免疫法

　　目前應用的生化免疫分析技術(shù)，是以抗原與抗體的特異性、可逆性結合反應為基礎的分析技術(shù)。其基本原理是抗原抗體的競爭性結合�？煞譃槊嘎�(lián)免疫測定法(ELISA)、熒光免疫測定法(FIA)、免疫分析技術(shù)與常規理化分析技術(shù)聯(lián)用的方法等。��

　　酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)：以待測抗原(或抗體)與酶標抗體(或抗原)的特異結合反應為基礎，通過(guò)酶活力測定來(lái)確定抗原(或抗體)含量。因為結合了免疫反應和酶催化反應，所以是一種特異而又敏感的技術(shù)。YONGJIN運用酶聯(lián)免疫法(ELISA)對慶大霉素的檢測限度為0.5ng/mL。Bucknal等運用免疫檢測法測定了在牛奶中幾種喹諾酮藥物的殘留量。酶聯(lián)免疫法測定，其敏感性和特異性好，檢測的靈敏度以普遍使用的β-內酰胺類(lèi)計：青霉素為5ppb，阿莫西林為10ppb，氨芐西林為10ppb，頭孢西林為8ppb。其檢測結果快速準確，9分鐘內即可檢測出牛奶中β-內酰胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、磺胺類(lèi)等抗生素的殘留含量，可監控牧場(chǎng)用藥的情況。

　　熒光免疫測定(FIA)法原理是應用一對單克隆抗體的夾心法。底物用磷酸-4-甲基傘形酮，檢測產(chǎn)物發(fā)出的熒光，熒光強度與抗原抗體復合物(Mb)濃度呈正比，可在8min內得出結果。結果以Mb每小時(shí)釋放的速率表示(△Mb)表示。Huth已經(jīng)用熒光免疫法測定了牛奶中的6種β-內酰胺類(lèi)抗生素，得到它們的最低檢測限為：青霉素G3.2μg/kg、氨芐青霉素2.9μg/kg、羥氨芐青霉素3.6μg/kg、頭孢匹林16.3μg/kg;該法重復性好，具有快速、敏感、準確的特點(diǎn)。生化免疫法測定抗生素殘留靈敏度極高，達到ng級水平;檢測快速、專(zhuān)一性強。由于此法的高度專(zhuān)一性，每檢測一種抗生素就要制備或購買(mǎi)相應的抗原或抗體，導致檢測費用較高。因此生化免疫檢測法不可能取代色譜或光譜等常規分析方法，只能作為其重要的補充。

　　��4專(zhuān)一試劑盒法��

　　ECLIPSE試劑盒的原理是含有芽孢桿菌的瓊脂培養基和pH指示劑，當在(65±1)℃下培養時(shí)，孢子發(fā)育生長(cháng)，降低培養基pH值，在pH指示劑的作用下，藍(紫)色變?yōu)榫G-黃色。生鮮牛乳中的抗生素殘留使微生物生長(cháng)和酸的產(chǎn)生受到抑制，由于沒(méi)有酸生成，顏色將不會(huì )改變。。��

　　ECLIPSE試劑盒有ECLIPSE50和ECLIPSE100兩種試劑盒。ECLIPSE50的精確度雖然沒(méi)有ECLIPSE100的高，但其檢測限都符合歐盟標準，彌補了快速方法只能單一檢測某類(lèi)抗生素的缺陷，同時(shí)提高了檢測的廣譜性和高靈敏度，同時(shí)也可以同歐盟等國家的先進(jìn)檢測技術(shù)和標準接軌我國的牛奶事業(yè)提供非常有效和準確的抗生素殘留檢測方法。且操作簡(jiǎn)單，靈活性強，無(wú)需對樣品進(jìn)行任何的處理，只需嚴格按照說(shuō)明書(shū)上規定的方法進(jìn)行操作，就能獲得理想的效果，且不易出現假陽(yáng)性現象，被檢樣品的需要量少，且費用低，越來(lái)越被廣泛應用。��

　　乳制品抗生素殘留的檢測方法很多，有的操作煩瑣,有的實(shí)驗條件要求高，有的檢驗時(shí)間太長(cháng);這些不僅會(huì )給乳制品生產(chǎn)企業(yè)造成經(jīng)濟上和時(shí)間上的損失，而且檢測結果常常會(huì )被原輔材料和人為操作等因素所影響。牛奶中抗生素殘留是涉及人類(lèi)健康的公共衛生問(wèn)題，開(kāi)發(fā)出越來(lái)越準確、快速，誤差越來(lái)越小的檢測方法，方便地檢出乳和乳制品中抗生素殘留，凈化消費環(huán)璄，就能為居民的身心健康提供保障，促進(jìn)中國乳業(yè)健康發(fā)展。