國家標準：食品衛生微生物學(xué)檢驗 菌落總數測定

　　食品衛生微生物學(xué)檢驗 菌落總數測定

　　中華人民共和國國家標準

　　食品衛生微生物學(xué)檢驗 GB 4789.2-94

　　菌落總數測定

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　　1 主題內容與適用范圍

　　本標準規定了食品中菌落總數的測定方法。

　　本標準適用于食品中菌落總數的測定。

　　2 術(shù)語(yǔ)

　　菌落總數是指食品檢樣經(jīng)過(guò)處理,在一定條件下培養后(如培基成分、培養溫度和時(shí)

　　間、pH、需氧性質(zhì)等),所得1mL(g)檢樣中所含菌落的總數。本方法規定的培養條件下所

　　得結果,只包括一群在營(yíng)養瓊脂上生長(cháng)發(fā)育的嗜中溫性需氧的菌落總數。

　　菌落總數主要作為判定食品被污染程度的標志,也可以應用這一方法觀(guān)察細菌在食

　　品中繁殖的動(dòng)態(tài),以便對被檢樣品進(jìn)行衛生學(xué)評價(jià)時(shí)提供依據。

　　3 引用標準

　　GB 4789.28 食品衛生微生物學(xué)檢驗 染色法、培養基和試劑

　　4 設備和材料

　　4.1 溫箱：36±1℃。

　　4.2 冰箱：0～4℃。

　　4.3 恒溫水�。�46±1℃。

　　4.4 天平。

　　4.5 電爐。

　　4.6 吸管。

　　4.7 廣口瓶或三角瓶：容量為500mL。

　　4.8 玻璃珠：直徑約5mm。

　　4.9 平皿：直徑為90mm。

　　4.10 試管。

　　4.11 放大鏡。

　　4.12 菌落計數器。

　　4.13 酒精燈。

　　4.14 均質(zhì)器或乳缽。

　　4.15 試管架。

　　4.16 滅菌刀或剪子。

　　4.17 滅菌鑷子。

　　5 培養基和試劑

　　5.1 營(yíng)養瓊脂培養基：按GB 4789.28中4.7規定。

　　5.2 磷酸鹽緩沖稀釋液：按GB 4789.28中3.22規定。

　　5.3 生理鹽水。

　　5.4 75%乙醇。

　　6 檢驗程序

　　菌落總數的檢驗程序如下。

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　　│ 檢 樣 │

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　　│ 做成幾個(gè)適當倍數的稀釋液 │

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　　↓

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　　│ 選擇2～3個(gè)適宜稀釋度 │

　　│ 各以1mL分別加入滅菌平皿內 │

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　　↓

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　　│ 每皿內加入適量營(yíng)養瓊脂 │

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　　36±1℃ ↓ 48±2h

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　　│ 菌落計數 │

　　└─────┘

　　↓

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　　│ 報 告 │

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　　7 操作步驟

　　7.1 檢樣稀釋及培養

　　7.1.1 以無(wú)菌操作,將檢樣25g(或mL)剪碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的

　　滅菌玻璃瓶?jì)?瓶?jì)阮A置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經(jīng)充分振搖或研磨做成1∶10

　　的均勻稀釋液。

　　固體檢樣在加入稀釋液后,最好置均質(zhì)器中以8 000～10 000r/min的速度處理1min,

　　做成1∶10的均勻稀釋液。

　　7.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水或其

　　他稀釋液的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液),振搖試管,混合均勻,做成1∶10

　　0的稀釋液。

　　7.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作順序,做10倍遞增稀釋液,如此每遞增稀釋一次,

　　即換用1支1mL滅菌吸管。

　　7.1.4 根據食品衛生標準要求或對標本污染情況的估計,選擇2～3個(gè)適宜稀釋度,分別

　　在做10倍遞增稀釋的同時(shí),即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內,每個(gè)稀

　　釋度做兩個(gè)平皿。

　　7.1.5 稀釋液移入平皿后,應及時(shí)將涼至46℃營(yíng)養瓊脂培養基(可放置于46±1℃水浴保

　　溫)注入平皿約15mL,并轉動(dòng)平皿使混合均勻。同時(shí)將營(yíng)養瓊脂培養基傾入加有1mL稀釋

　　液的滅菌平皿內作空白對照。

　　7.1.6 待瓊脂凝固后,翻轉平板,置36±1℃溫箱內培養48±2h。

　　7.2 菌落計數方法

　　做平板菌落計數時(shí),可用肉眼觀(guān)查,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏。在記下各平板

　　的菌落數后,求出同稀釋度的各平板平均菌落總數。

　　7.3 菌落計數的報告

　　7.3.1 平板菌落數的選擇

　　選取菌落數在30～300之間的平板作為菌落總數測定標準。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平

　　板,應采用兩個(gè)平板平均數,其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(cháng)時(shí),則不宜采用,而應以

　　無(wú)片狀菌落生長(cháng)的平板作為該稀釋度的菌落數,若片狀菌落不到平板的一半,而其余一

　　半中菌落分布又很均勻,即可計算半個(gè)平板后乘2以代表全皿菌落數。平皿內如有鏈狀

　　菌落生長(cháng)時(shí)(菌落之間無(wú)明顯界線(xiàn)),若僅有一條鏈,可視為一個(gè)菌落;如果有不同來(lái)源

　　的幾條鏈,則應將每條鏈作為一個(gè)菌落計。

　　7.3.2 稀釋度的選擇

　　7.3.2.1 應選擇平均菌落數在30～300之間的稀釋度,乘以稀釋倍數報告之(見(jiàn)表中例1)。

　　7.3.2.2 若有兩個(gè)稀釋度,其生長(cháng)的菌落數均在30～300之間,則視兩者之比如何來(lái)決定。

　　若其比值小于或等于2,應報告其平均數;若大于2則報告其中較小的數字(見(jiàn)表中例2及

　　3)。

　　7.3.2.3 若所有稀釋度的平均菌落數均大于300,則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以

　　釋稀倍數報告之(見(jiàn)表中例4)。

　　7.3.2.4 若所有稀釋度的平均菌落數均小于30,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀

　　釋倍數報告之(見(jiàn)表中例5)。

　　7.3.2.5 若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(cháng),則以小于1乘以最低稀釋倍數報告之(見(jiàn)表中例6)。

　　7.3.2.6 若所有稀釋度的平均菌落數均不在30～300之間,其中一部分大于300或小于30

　　時(shí),則以最接近30或300的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見(jiàn)表中例7)。

　　7.3.3 菌落數的報告

　　菌落數在100以?xún)葧r(shí),按其實(shí)有數報告,大于100時(shí),采用二位有效數字,在二位有效

　　數字后面的數值,以四舍五入方法計算。為了縮短數字后面的零數,也可用10的指數來(lái)

　　表示(見(jiàn)表中“報告方式”欄)。

　　稀釋度選擇及菌落數報告方式

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　　│ 稀釋液及菌落數 │ │菌落總數│ 報告方式

　　例次├────┬────┬───┤兩稀釋液之比│個(gè)/g或mL│ 個(gè)/g或mL

　　│ 10-1 │ 10-2 │ 10-3 │ │ │

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　　1 │多不可計│ 164 │ 20 │ - │ 16 400 │16 000或1.6×10**4

　　2 │多不可計│ 295 │ 46 │ 1.6 │ 37 750 │3 8000或3.8×10**4

　　3 │多不可計│ 271 │ 60 │ 2.2 │ 27 100 │27 000或2.7×10**4

　　4 │多不可計│多不可計│ 313 │ - │ 313 000│31 000或3.1×10**5

　　5 │ 27 │ 11 │ 5 │ - │ 270 │270或2.7×10**2

　　6 │ 0 │ 0 │ 0 │ - │ <1×10│ <10

　　7 │多不可計│ 305 │ 12 │ - │ 30 500│31 000或3.1×10**4

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　　附加說(shuō)明：

　　本標準由衛生部衛生監督司提出。

　　本標準由衛生部食品衛生監督檢驗所負責起草。

　　本標準主要起草人劉宏道。

　　本標準由衛生部委托技術(shù)歸口單位衛生部食品衛生監督檢驗所負責解釋。