組織勻漿的制備方法

　　1、取組織塊(0.2g~1g)最少可到2～5mg，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱(chēng)重，放入5或10ml的小燒杯內

　　2、用移液管量取預冷的勻漿介質(zhì)(ph7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖0.8%的氯化鈉溶液)或者用0.86%冷生理鹽水，勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍，用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質(zhì)或生理鹽水于燒杯中，用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中)。

　　3、勻漿的方式有多種：手工勻漿、機器勻漿、超聲勻漿、反復凍融。

　　手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動(dòng)研磨數十次(6～8分鐘)，充分研碎，使組織勻漿化。

　　機器勻漿：用組織研磨機(OMNIBead Ruptor 24 多樣品研磨珠均質(zhì)儀) 6m/s研磨制成10%組織勻漿，也可用內切式組織勻漿機制備(Omni Prep 多樣品均質(zhì)儀 )勻漿時(shí)間20秒/次，間隙10秒，連續3-5次。

　　超聲粉碎：用超聲波細胞破碎儀(OMNI Sonic Ruptor400W)進(jìn)行破碎，可用以振幅12.7mm超聲處理30秒使細胞破碎.

　　反復凍融：培養或者分離的細胞可以用以上的方法勻漿，也可以反復凍溶3次左右(即讓細胞加適量的低滲液或者雙蒸水放低溫冰箱中結冰，溶解，再結冰，再溶解，反復3次左右)，但有部分酶活力會(huì )受影響。

　　取少量組織勻漿做涂片(直接涂片、染色均可)，顯微鏡下觀(guān)察細胞是否磨破，若沒(méi)有破則可以延長(cháng)勻漿時(shí)間或增加凍融次數。

　　4、將制備好的10%勻漿用普通離心機或低溫低速離心機3000r/min左右離心10～15分鐘，若檢測ATP酶，則只需要1000轉/分，離心5分鐘，將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀。

　　根據你的實(shí)驗需要，取適量上清夜進(jìn)行各種測定。