細胞培養基本條件

　　1 合適的細胞培養基

　　合適的細胞培養基是體外細胞生長(cháng)增殖的最重要的條件之一,培養基不僅提供細胞營(yíng)養和促使細胞生長(cháng)增殖的基礎物質(zhì),而且還提供培養細胞生長(cháng)和繁殖的生存環(huán)境。

　　2 優(yōu)質(zhì)血清

　　目前,大多數合成培養基都需要添加血清.血清是細胞培養液中最重要的成分之一,含有細胞生長(cháng)所需的多種生長(cháng)因子及其它營(yíng)養成分。

　　3 無(wú)菌無(wú)毒細胞培養環(huán)境

　　無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養環(huán)境是保證細胞在體外培養成功的首要條件.在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染,或者自身代謝物質(zhì)積累,可導致細胞中毒死亡.因此,在體外培養細胞時(shí),必須保持細胞生存環(huán)境無(wú)菌無(wú)毒,及時(shí)清除細胞代謝產(chǎn)物。

　　4 恒定的細胞生長(cháng)溫度

　　維持培養細胞旺盛生長(cháng),必須有恒定而適宜的溫度.不同種類(lèi)的細胞對培養溫度要求也不同.人體細胞培養的標準溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細胞的正常代謝會(huì )受到影響,甚至死亡.培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過(guò)39℃時(shí),細胞代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時(shí),即能受到一定損傷,但仍有可能恢復;在40-41℃1小時(shí),細胞會(huì )普遍受到損傷,僅小半數有可能恢復;41-42℃1小時(shí),細胞受到嚴重損傷,大部分細胞死亡,個(gè)別細胞仍有恢復可能;當溫度在43℃以上1小時(shí),細胞全部死亡.相反,溫度不低于0℃時(shí),對細胞代謝雖有影響,但并無(wú)傷害作用;把細胞放入25-35℃時(shí),細胞仍能生存和生長(cháng),但速度減慢;放在4℃數小時(shí)后,再回到37℃培養,細胞仍能繼續生長(cháng).細胞代謝隨溫度降低而減慢.當溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí),細胞可因胞質(zhì)結冰受損而死亡.但是,如果向培養液中加入一定量的冷凍保護劑(二甲亞砜或甘油),可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長(cháng)期保存。

　　5 合適的氣體環(huán)境

　　氣體是哺乳動(dòng)物細胞培養生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。