紫外分光光度法檢測保健食品中大豆異黃酮的含量

　　【摘要】目的：以大豆苷元為標準品，用紫外分光光度法檢測三種市售保健品中大豆異黃酮總濃度.方法：保健品用甲醇 水(80 20,V/V)在70℃超聲提取40min，以大豆中的活性成分大豆苷元為標準品，檢測波長(cháng)254nm，計算樣品含量.結果：回歸方程為Y=0.138X-0.0056，R2=0.9994,線(xiàn)性范圍：0.8～6.4mg/L,平均回收率為99.32%,RSD=0.044%.結論：本方法適用于檢測保健食品中大豆異黃酮含量.

　　【關(guān)鍵詞】保健食品;大豆異黃酮;大豆苷元;紫外分光光度

　　0引言

　　大豆異黃酮含量測定的方法很多[1]，主要有高效液相色譜法(HPLC)，高效液相色譜質(zhì)譜法(HPLCMS)、氣相色譜法(GC)和毛細管電泳法.我們采用的紫外分光光度法與其它方法相比，簡(jiǎn)便快捷，且對儀器設備要求不高，目前用此方法測定保健食品中大豆異黃酮含量少見(jiàn)報道.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　TU9100型紫外分光光度計(北京瑞利分析儀器公司);TU1800紫外可見(jiàn)分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);RE52AA旋轉蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠(chǎng))，KQ100型超聲機(昆山市超聲儀器有限公司).大豆苷元標準品(中國藥品生物制品檢定所1502200101).市售保健品3種：安睡美(華博眾生物科技有限公司);天雌(四川旭化華制藥有限公司);欣靚(華北制藥康欣有限公司).甲醇(分析純).氯仿(分析純).

　　1.2方法

　　1.2.1保健品中大豆異黃酮提取與分離取保健品4粒，精密稱(chēng)質(zhì)量，置100mL圓底燒瓶中，加800mL/L甲醇70mL超聲提取40min，趁熱抽濾,甲醇提取液在35℃減壓蒸去甲醇，然后在45℃減壓蒸去水，再加入20mL甲醇溶解作為供試品溶液備用.

　　1.2.2大豆異黃酮苷元的檢驗

　　1.2.2.1薄層色譜用硅膠GF254薄層板，以氯仿無(wú)水甲醇(10∶0.5)為展開(kāi)劑，用標準品和樣品點(diǎn)樣(無(wú)水甲醇溶解)，在254nm紫外燈下檢測，見(jiàn)圖1.

　　1.2.2.2紫外分光光度檢測用TU1800紫外可見(jiàn)分光光度計在波段200～400nm條件下分別檢測無(wú)水甲醇、標準品、樣品.

　　2結果

　　2.1標準品溶液的配制及標準曲線(xiàn)的制備[2]精確稱(chēng)取大豆苷元標準品2.0mg，置于25mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻線(xiàn)，搖勻.分別精密吸取標準品溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.6,0.8mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻線(xiàn)，搖勻.以甲醇為空白，在254nm的波長(cháng)處測定A值.以濃度為橫坐標，A值為縱坐標繪制標準曲線(xiàn)，得回歸方程Y=0.138X-0.0056，R2=0.9994，線(xiàn)性范圍0.8～6.4mg/L.

　　2.2含量測定精確量取供試品溶液0.01mL，用無(wú)水甲醇稀釋1000倍到10mL定容，用TU9100型紫外分光光度計在波長(cháng)254nm處測定A值3次，取平均值.測定結果，根據標準曲線(xiàn)計算樣品含量(表1).表1三種樣品的含量(略)

　　2.3精密度實(shí)驗同一供試品溶液(天雌)0.01mL，用無(wú)水甲醇稀釋1000倍到10mL定容，用TU9100型紫外分光光度計在波長(cháng)254nm處連續測定6次A值，分別為0.102,0.099,0.100,0.100,0.099,0.096，結果RSD=0.133%，說(shuō)明儀器精密度較好.

　　2.4加樣回收率實(shí)驗[3]向已知含量的樣品(天雌)中加入不同量的大豆苷元標準品，按2.2的方法進(jìn)行含量測定，計算回收率，結果見(jiàn)表2.回收率的平均值為99.32%，RSD=0.044%，表明方法的回收率較好.表2回收率測定結果(略)

　　3討論

　　由于配置的供測品使用甲醇為溶劑，大豆異黃酮放置過(guò)程中可能有分解，所以進(jìn)行了穩定性實(shí)驗.將同一供試品溶液(天雌)每隔30min測定1次A值，6次測定結果分別為0.102,0.099,0.097,0.095,0.096,0.092,RSD=0.25%，表明供試品溶液在3h內穩定.

　　4結論

　　紫外分光光度法測定保健食品中大豆異黃酮含量與其它方法比較簡(jiǎn)便快捷，對儀器設備要求不高,重現性好,適用于保健食品中大豆異黃酮含量的測定.