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    生化實(shí)驗室常用儀器操作一覽

    [2011/7/13]

      【冷凍真空干燥機】

      基本原理

      高真空狀態(tài)下,利用升華原理使預先凍結的物料中的水份直接從冰態(tài)升華為水蒸汽而被除去,從而使物料干燥。真空冷凍干燥廣泛應用于多種產(chǎn)品,可確保物品中蛋白質(zhì)、維生素等各種營(yíng)養成份,特別是那些易揮發(fā)熱敏性成份不損失,因而能最大限度地保持原有的營(yíng)養成份。還能有效防止干燥過(guò)程中的氧化,可以避免營(yíng)養成份的轉化和狀態(tài)變化。凍干制品呈海綿狀、無(wú)干縮、復水性好、含水份極少,相應包裝后可在常溫下長(cháng)時(shí)間保存和運輸。

      操作步驟

      1、系統準備

      檢查系統是否清潔和干燥,真空泵與冷凍機是否連接,接通電源,檢查排氣口、冷凍管的密封性。

      2、加樣

      樣品需要預冷到至少-40℃,可以在深低溫冰箱(-70℃)或者液氮(-196℃)中進(jìn)行。打開(kāi)密封管開(kāi)關(guān),搬開(kāi)冷凍艙,將樣品置于冷凍艙里的隔板上。關(guān)閉密封管開(kāi)關(guān)。

      3、冷凍

      打開(kāi)冷凍開(kāi)關(guān),等待20~30分鐘,直到冷凍艙的溫度低于-40℃。

      4、抽真空

      打開(kāi)真空泵開(kāi)關(guān),等待10~15分鐘,直到系統壓力低于100 millitorr。

      5、監控過(guò)程

      確保系統參數(冷凍溫度、真空壓力)在正常范圍內;

      定期檢查冷凍艙中的結冰情況,決定是否要除霜;

      觀(guān)察樣品是否干燥完全,一般干燥過(guò)程需要24~72小時(shí),視具體樣品通過(guò)目測而定。

      6、關(guān)閉系統

      關(guān)閉總開(kāi)關(guān),接上排氣管或打開(kāi)密封管開(kāi)關(guān)以解除真空狀態(tài)。

      關(guān)閉真空開(kāi)關(guān),關(guān)閉冷凍開(kāi)關(guān),取出樣品。

      7、系統維護

      除霜:冷凍艙下面的壓縮艙內如果有霜,則接上排水管,然后用少量熱水(不能超過(guò)壓縮艙容積的一半)促進(jìn)冰霜的融化。不能通過(guò)敲擊冰塊來(lái)除霜。

      除濕:壓縮艙、冷凍艙、真空泵壓縮機以及墊圈等表面的水霧均需擦干。

      清潔:壓縮艙、冷凍艙可以用溫和的去污劑或蘇打水來(lái)清洗,然后干燥并撤去排水管,并重新密封排水孔。

      泵油:定期檢查油位,排除油霧。

      注意事項

      1、樣品要保持冷凍,不能“回融”。

      大多數溶劑的冰點(diǎn)高于-40℃,所以冷凍艙溫度低于-40℃可以使一般樣品保持冰態(tài)。

      為確保樣品不“回融”,可將冰凍的樣品制成小于20 mm的小塊。

      2、有毒或有腐蝕性的樣品。

      最好不要用來(lái)冷凍干燥,如果一定要用,則更加需要系統維護,并需要另外定購特定的濾器以保護真空泵。

      3、真空泵油需保持干凈。

      微黃或無(wú)色的油是干凈的,顏色變深表示有酸污染,霧狀渾濁表示有水污染。有污染時(shí)需要更換好油。

      【自動(dòng)雙重蒸餾水器】

      操作說(shuō)明

      1.擰開(kāi)自來(lái)水龍頭,讓水流開(kāi)始較為細小,觀(guān)察第一管水位超過(guò)石英加熱管;

      2. 接通電源,按下第一管的ON開(kāi)關(guān),這時(shí)水速仍以細小為主,等待第一管內自來(lái)水沸騰,這時(shí)候將水流逐漸調大至適中程度;

      3. 等待第二管內自來(lái)水超過(guò)石英加熱管,按下第二管的ON開(kāi)關(guān),第二管隨即加熱,注意觀(guān)察兩個(gè)管子的水位變化,及時(shí)做出調整。

      4.一般來(lái)說(shuō)有下面三種情況:

      a→第一管水位過(guò)高,接近水蒸氣散出口,這時(shí)宜將調整水位的橡膠管放置低于玻璃管位置,待自來(lái)水流出至適當位置,將橡膠管回復原位;

      b→第一管水位過(guò)低,調整自來(lái)水龍頭加大進(jìn)水,或者調節橡膠管上控制開(kāi)關(guān)加大進(jìn)水,乃至關(guān)閉電源待進(jìn)水到適當位置,重新打開(kāi)電源,繼續蒸餾。

      C→第二管水位過(guò)低,按下第二管的OFF開(kāi)關(guān),待水位升高超過(guò)石英加熱管時(shí)再開(kāi)始蒸餾。

      5. 雙蒸結束,先關(guān)閉控制面板上OFF兩個(gè)電源,然后關(guān)自來(lái)水龍頭。

      【高壓鍋】

      操作程序

      1.打開(kāi)鍋蓋,倒入蒸餾水,滿(mǎn)至WATER LEVEL,以后每次使用時(shí),必須補足水滿(mǎn)到WATER LEVEL。

      2.把插頭插上電源,按電源開(kāi)關(guān)ON,顯示器指示燈亮起,機器開(kāi)始進(jìn)行程序自檢。

      3.按顯示屏的提示輸入工作密碼。

      4.放置待滅菌的物品入滅菌室,并旋緊鍋蓋。

      5.根據所高壓物品的不同,按過(guò)程選擇鍵1-6中的某一數字選擇不同的滅菌流程。一般固體滅菌選擇按鍵4,液體滅菌選擇按鍵5。特殊要求的,可以先按下MODE鍵,輸入工作密碼。選擇要重新設置的項目進(jìn)行修改。

      6.按啟動(dòng)鍵START鍵,即開(kāi)始此滅菌模式。

      NOTE:須待機器進(jìn)入正常運行程序后,人方可離開(kāi)。

      7.當滅菌流程結束時(shí),響鈴鳴叫30秒。

      8.確認壓力顯示器的壓力降為0以后,把鍋門(mén)把手旋松,讓殘余蒸氣釋出,待5-10分鐘后推開(kāi)跨桿,準備取出滅菌物品。如需高壓另一鍋,則需重新加水滿(mǎn)到WATER LEVEL,同時(shí)處理廢水收集瓶中的廢水。

      9.在高壓鍋使用記錄上進(jìn)行登記。

      【離心機】

      操作步驟:

      1、將離心機打開(kāi),儀器此時(shí)的工作狀態(tài)為最后操作設置的參數。

      2、平衡離心管,兩兩對稱(chēng)放入離心機。

      3、蓋好離心蓋,蓋子鎖上時(shí)才能離心。

      4、選擇操作模式:

      設置參數:1)離心速度:300rpm~14000rpm;2)離心時(shí)間:1min~99min;

      3)離心溫度:-10℃~40℃;4)最低加速度:1~5個(gè),1最慢

      5)最低減速度:0~4 coast-down,(0是慣性)

      (1)手工模式:不重新設置時(shí),按上次設置的參數離心,可以重新設置參數離心。

      (2)程序模式:可預先設置5個(gè)程序儲存,不同的程序按不同的序號,相應的指示燈亮,再按另外的序號可以選另外的程序。

      (3)瞬時(shí)(MOM)操作模式:持續按MOM鍵,可使離心達到最大速度和最大加速度,當放開(kāi)時(shí)離心減慢直到停止,離心時(shí)顯示的時(shí)間是已經(jīng)用了的時(shí)間(以秒計數)。

      5、按START鍵,開(kāi)始離心,綠燈亮。此時(shí)顯示實(shí)際的離心速度和溫度,時(shí)間為剩余時(shí)間。

      6、當設置時(shí)間到,離心機通過(guò)制動(dòng)裝置自動(dòng)停止離心,黃燈亮,可以打開(kāi)離心蓋。

      如何設置相應參數?

      1、用”key-programe”取消錯選的程序。

      2、用“SOFT ACL”鍵設置加速度:高加速燈滅,低加速燈亮;按住鍵3秒,燈閃爍,用設置離心速度的鍵選擇1~5

      3、用“SOFT DCL”鍵設置加速度:高減速燈滅,低減速燈亮;按住鍵3秒,燈閃爍,用設置離心速度的鍵選擇0~4

      4、設置離心溫度、速度和時(shí)間:當“SET”燈閃爍時(shí),可以改變參數,用箭頭鍵選擇。設置后3秒,燈停止閃爍,自動(dòng)確認。

      如何記憶一個(gè)程序?

      1、在設置的參數閃爍時(shí),按程序鍵1~5,當程序鍵旁的燈亮時(shí),參數被儲存。

      2、保護程序不被修改:可以在參數閃爍時(shí),按一個(gè)程序鍵的同時(shí)按下“LOCK PROG(STOP)”鍵。取消保護時(shí)再次按程序鍵同時(shí)按下“LOCK PROG(STOP)”鍵。

      警告信息:

      1、END:在每次離心循環(huán)結束時(shí)顯示,在進(jìn)行下一次操作時(shí)顯示設置得參數。

      2、LID:當離心開(kāi)始而蓋子沒(méi)蓋緊時(shí)顯示,并報警。

      3、IMBAL:當離心物品不平衡時(shí)顯示,并報警。

      4、MAIMS:當動(dòng)力系統出錯時(shí)顯示。

      5、OVERT:當離心室里的溫度>45℃時(shí)顯示。

      6、SET:當設置速度大于最大離心速度時(shí)顯示。

      注意事項:

      1、離心時(shí)不要移動(dòng)或轉動(dòng)儀器。

      2、不要使用說(shuō)明書(shū)不允許使用的轉子和附屬物。

      3、不能超過(guò)最大轉速。

      4、不使用不適合離心的管子或瓶子。

      5、不在儀器周?chē)胖梦kU品。

      6、不使用易燃易爆物。

      【雜交爐】

      操作步驟

      1、設置溫度

      按一下up或down鍵,顯示屏將由亮到暗開(kāi)始閃爍,此時(shí)顯示的是上次設置的溫度。如需改變,則通過(guò)up或down鍵來(lái)上調或下調。停按5秒鐘后,數字停止閃爍,并開(kāi)始顯示爐內溫度。(第一次使用前需要至少24小時(shí)來(lái)穩定加熱器。)

      2、校準

      需要校準顯示溫度與實(shí)際溫度是否一致。將一枝標準溫度計置于樣品附近,穩定1小時(shí)后,比較2者的數值是否一致。

      如需校準,則同時(shí)按住up和down鍵直到顯示屏上數字中前后2個(gè)小數點(diǎn)開(kāi)始閃動(dòng),然后用up或down鍵來(lái)改變數值,使其與溫度計的參考數值一致。再次穩定加熱器。

      3、轉速調節

      轉動(dòng)開(kāi)關(guān)有3個(gè)位置,上位表示開(kāi),其轉速可在0~15 RPM之間調節;中位表示關(guān);下位表示短時(shí)間轉動(dòng),按住才轉動(dòng)松開(kāi)即關(guān)。

      維護

      使用前后觀(guān)察系統是否清潔,如果不是,則需要清洗。

      1、顱腔

      用肥皂和水進(jìn)行清洗,然后干燥。如有污染,則用適當的消毒劑清洗,注意不要用含氯漂白劑,否則容易造成損壞。

      2、接水盤(pán)和旋轉架

      先取下來(lái),然后用同樣的溶液進(jìn)行清洗。

      【干膠儀】

      操作步驟

      1.將干膠儀的排水管連接到真空泵上,閥門(mén)旋到開(kāi)的位置。

      2.打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)。

      3.選擇干膠CYCLE:

      a.按CYCLE健兩次;

      b.當燈在閃動(dòng)狀態(tài)時(shí),按RAISE或LOWER健選擇干膠CYCLE。

      4. 選擇循環(huán)溫度:

      a.按TEMP鍵兩次;

      b. 當燈在閃動(dòng)狀態(tài)時(shí),按RAISE或LOWER健選擇溫度。

      5.選擇循環(huán)時(shí)間:

      a.按TIME鍵兩次;

      b. 當燈在閃動(dòng)狀態(tài)時(shí),按RAISE或LOWER健選擇時(shí)間。

      6.將膠放在干膠儀里(將膠放在透明的保護蓋的下面,在膠的表面覆蓋一層塑料薄膜)。

      7.打開(kāi)真空泵。

      8.按START鍵開(kāi)始干膠程序。

      9.干膠程序完成后,打開(kāi)透明的保護蓋,閥門(mén)旋到開(kāi)的位置,然后關(guān)掉真空泵。

      干膠時(shí)間的選擇

      膠的濃度 膠的厚度 80℃所需時(shí)間

      3%至20% 0.375mm        30min

      3%至20% 0.5mm 40min

      3%至10% 0.75mm 40min到60min

      10%至20% 0.75mm 60min到120min

      3%至10% 1.5mm 45min到60min

      10%至20% 1.5mm 60min到120min

      3%至10% 3mm 60min到120min

      10%至20% 3mm 120min到180min

      【Leica熒光顯微鏡】

      簡(jiǎn)要操作步驟

      1.打開(kāi)12V/100W Leica的電源開(kāi)關(guān),至少預熱10分鐘。

      2.打開(kāi)顯微鏡的電源開(kāi)關(guān)。

      3.放置樣品,調好放大倍數、焦距和視野。

      4.移動(dòng)light stop至 。

      5.滑動(dòng)filter block至相應光路。

      6.將光線(xiàn)調節旋鈕調到最小。

      7.鏡下觀(guān)察樣品的熒光染色情況。

      8.如果樣品有微紅色背景,可以將BG 38 filter移動(dòng)至 ,以消除背景色的干擾。

      9.如要拍照,需將相機與顯微鏡連接,將顯微鏡上的拉桿拉出,這時(shí)在相機上可直接觀(guān)察樣品的熒光染色情況,并拍照保存。

      10.結束后,關(guān)掉顯微鏡和12V/100W Leica的電源開(kāi)關(guān)。

      【PCR儀】

      操作步驟:

      -RUN ENTER

      PROGRAM PROGRAM

      1、開(kāi)機:打開(kāi)開(kāi)關(guān),視窗上顯示“SELF TEST”,顯示10秒中后,顯示RUN-ENTER菜單:準備執行程序。

      2、放入樣本管,關(guān)緊蓋子。

      3、如果要運行已經(jīng)編好的程序,則直接按《Proceed》,用箭頭鍵選擇已儲存的程序,按《Proceed》,則屏幕顯示:

      -ENABLE DISABLE

      heated lid

      按《Proceed》選擇ENABLE,則開(kāi)始執行程序。

      -NEW LIST

      EDIT DELET

      4、如果要輸入新的程序,則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM,按《Proceed》,屏幕顯示

      Step 1 _TEMP

      GOTO Opiton End

      按《Proceed》,1)選擇NEW,命名新的程序,最多8個(gè)字母,輸入后按《Proceed》確認(如何輸入字母、數字)。

      2)輸入程序步驟:名字輸入后,顯示

      按《Proceed》則可以輸入溫度(0~100℃),按《Proceed》確認后,則可以輸入孵育時(shí)間,用《Select》鍵移動(dòng)光標,輸入數字,完成后按《Proceed》確認,跳到下一步,輸入方式同上。

      3)選擇GOTO,輸入循環(huán)步驟時(shí)鏈接到第幾步(循環(huán)數最多可達9999次)(為實(shí)際循環(huán)數-1)。

      Step extend

      Increment slope

      4) 選擇option,再選擇increment,按《Proceed》確認,輸入初始的溫度,確認后輸入時(shí)間,按《Proceed》確認,然后輸入每個(gè)循環(huán)增加或減少的溫度,增加用正值,減少用負值(-0.1℃~6℃),按《Proceed》確認。

      選擇extend, 按《Proceed》確認,輸入每個(gè)循環(huán)增加或減少的時(shí)間(-60~60秒),按《Proceed》確認。

      選擇slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1~1.5℃)按《Proceed》確認,然后輸入加熱或致冷的速度,按《Proceed》確認。

      4)選擇End,輸入結束步驟。

      5、輸入完成的程序后,到RUN-ENTER菜單,選擇新程序,開(kāi)始運行。

      6、其它:用《pause》可以暫停一個(gè)運行的程序,再按一次繼續程序。

      用《stop》或《Cancel》可停止運行的程序。

      編輯程序:

      1、可以用《Cancel》鍵刪除輸錯的值,輸入新的值后按《Proceed》確認。

      2、對于未輸完的程序,要先輸入END,按《Proceed》將程序儲存后才能刪除。

      3、刪除已經(jīng)儲存的程序:從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM,按《Proceed》,顯示主菜單,選擇DELET,用《Select》選擇刪除。

      4、查看程序的步驟:在主菜單上選擇LIST,按《Proceed》,用《Select》將選擇名稱(chēng),再按《Proceed》,顯示程序的第一步,用《Select》鍵向前、向后翻頁(yè)查看,此時(shí)不能改變程序的值。

      編輯已有的程序:

      1、從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM,按《Proceed》,顯示主菜單,選擇EDIT,按《Proceed》確認,用《Select》鍵選擇要編輯的程序,按《Proceed》顯示程序的第一步。

      2、用《Select》鍵將光標移到要改變的溫度或循環(huán)的值上,鍵入新值,按《Proceed》確認,按《Cancel》刪除鍵入的值,出現空格,鍵入新值后確認。

      注:一旦值被改變或刪除,原來(lái)的值不能恢復,必須重新鍵入。

      3、編輯時(shí)間值:必須重新鍵入小時(shí)、分鐘、秒,按《Proceed》。

      如何設置一個(gè)PCR體系:

      一般分為8步:

      1、預變性:可用94~95℃,2~10min,一般用5min。

      2、變性:一般用94℃,30s~2min,一般45s~1min。

      3、退火:溫度自定,30s~2min。

      4、延伸:70~75℃,一般72℃,對于〈2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。

      5、循環(huán)數:一般25~35個(gè)循環(huán)。

      6、最終延伸:72℃,5~15min。

      7、保存:10℃,時(shí)間設為0。

      8、END。

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